Mi a PCR elemzés?
A polimeráz láncreakció (PCR) analízis egy olyan laboratóriumi módszer, melynek célja kis mennyiségű DNS azonosítása a mintában egy amplifikációs eljárással. A PCR amplifikáció során az érdekes DNS-t többször egymás után másoljuk, amíg az elemzéshez és kimutatáshoz elegendő. Például PCR-t alkalmazhatunk kis mennyiségű DNS azonosítására olyan organizmusokból, amelyek gonorrhoeát vagy klamidit okoznak, és amelyek vizeletmintában vannak jelen.
Hogyan működik a PCR?
A PCR első lépése a minta melegítése, úgyhogy a kettős szálú DNS két különálló szálra oszlik - ezt nevezik denaturációnak . Ezután a minták DNS-ével kombináljuk a primereket , rövid DNS-mintákat, amelyek megfelelnek a kívánt DNS-szekvencia végeinek. Ezután DNS- polimerázt alkalmazunk a DNS-replikáció indítására a primer helyén. Végül a DNS-t felmelegítjük, hogy a szálakat még egyszer elkülönítsük, és az egész PCR eljárás újra elindul.
A mintában jelen lévõ érdekes DNS-szegmens mennyisége exponenciálisan növekszik minden PCR ciklusban: egy példány kettõs lesz, majd négy lesz, majd nyolc lesz; így általában csak 20-40 ciklusra van szükség annak meghatározására, hogy a kérdéses DNS jelen van-e (és ha igen, elegendő mintát szolgáltat az analízishez).
A polimeráz láncreakció minden lépése - a DNS denaturálása, primerek alkalmazása és a DNS megnyújtása - különböző hőmérsékleteken történik, így a kezdeti keverék összeállítása után a lépéseket egy termociklizációs eljárással vezérelhetjük, ahol a hőmérsékletet a szükséges szinteken kell tartani, elég hosszú ideig ahhoz, hogy minden lépés megtörténjen.
Tehát a PCR hatékony módja a cél DNS mennyiségének egyetlen tesztcsőben történõ amplifikálására, kevés humán beavatkozásra van szükség.
A polimeráz láncreakció forradalmat jelentett a biológiai technikában, amikor először az 1980-as évek elején alakult ki, és a PCR alkotója, Kary Mullis 1993-ban nyerte el a kémiai Nobel-díjat.
Miért fontos a PCR az STD teszteléshez?
A polimeráz láncreakció és az ehhez kapcsolódó technikák, például a ligáz láncreakció , egyre nagyobb jelentőséggel bírnak az STD vizsgálat során. Ennek az az oka, hogy ezek a technikák közvetlenül meghatározzák a kis mennyiségű vírus DNS-t vagy RNS-t a mintákban. A kórokozó genetikai kódjának azonosítása nem igényli a kórokozó életben tartását - például bakteriális kultúrát vagy virális kultúrát . Azt sem igényli, hogy a fertőzés elég hosszú idő teljen el ahhoz, hogy az emberek kifejlesztettek egy detektálható ellenanyagreakciót (például ELISA-val kimutatható). Ez azt jelenti, hogy a PCR-technikák néha más vizsgálatokat megelőzően észlelik a betegségeket, és annyira kell aggódnunk, hogy a mintákat életben tartjuk vagy a pontos időben teszteljük.